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SEM掃描電鏡對(duì)于生物樣品要怎么制備

日期:2025-03-07 09:52:12 瀏覽次數(shù):71

掃描電鏡對(duì)于生物樣品的制備過(guò)程相對(duì)復(fù)雜,因?yàn)樯飿悠吠ǔ>哂泻扛?、質(zhì)地柔軟、導(dǎo)電性差以及對(duì)熱和電子束敏感等特點(diǎn)。以下是生物樣品制備的詳細(xì)步驟:

取樣:

使用無(wú)菌工具(如無(wú)菌剪刀或刀片)從生物體中**地剪取或切割樣品。對(duì)于微生物樣品,可能需要從培養(yǎng)基或生物膜上取樣。

確保樣品大小適中,通常不超過(guò)1立方毫米,以便于處理和觀察。

掃描電鏡.jpg

固定:

將樣品放入含有適當(dāng)固定劑(如2.5%戊二醛溶液)的離心管或容器中。

調(diào)整溶液的pH值(如pH=6.8),以確保固定效果。

將樣品在固定劑中浸泡一段時(shí)間(如1.5小時(shí)或過(guò)夜),以固定其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

沖洗:

使用適當(dāng)?shù)木彌_液(如磷酸緩沖溶液)對(duì)樣品進(jìn)行多次沖洗,以去除固定劑和其他雜質(zhì)。

每次沖洗時(shí)間通常為10-15分鐘,沖洗次數(shù)根據(jù)樣品情況而定。

脫水:

使用不同濃度的乙醇溶液對(duì)樣品進(jìn)行梯度脫水處理。

從低濃度(如50%、70%、80%、90%)到高濃度(****)逐步脫水,每次脫水時(shí)間通常為10-15分鐘。

脫水過(guò)程有助于去除樣品中的水分,為后續(xù)處理做準(zhǔn)備。

置換:

使用乙醇和乙酸異戊酯的混合液或純乙酸異戊酯對(duì)樣品進(jìn)行置換處理。

置換過(guò)程有助于去除乙醇并準(zhǔn)備進(jìn)行干燥處理。

干燥:

使用臨界點(diǎn)干燥儀、冷凍干燥儀或其他干燥方法對(duì)樣品進(jìn)行徹底干燥。

干燥過(guò)程應(yīng)確保樣品表面不發(fā)生變形或損傷,同時(shí)保持其原始形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

粘樣:

使用導(dǎo)電膠或其他適當(dāng)?shù)恼澈蟿悠氛迟N在專(zhuān)為掃描電鏡設(shè)計(jì)的樣品臺(tái)上。

確保樣品觀察面朝上并與導(dǎo)電膠緊密貼合。

導(dǎo)電處理:

對(duì)于不導(dǎo)電或?qū)щ娦圆畹臉悠罚枰谄浔砻驽兩弦粚訉?dǎo)電膜(如金膜)。

使用離子濺射鍍膜儀或其他鍍膜設(shè)備在樣品表面鍍上一層均勻且厚度適當(dāng)?shù)膶?dǎo)電膜。

進(jìn)樣與觀察:

將處理好的樣品放入掃描電子顯微鏡的進(jìn)樣室中。

調(diào)整樣品角度和位置,確保觀察區(qū)域清晰可見(jiàn)。

關(guān)閉進(jìn)樣室并啟動(dòng)掃描電子顯微鏡進(jìn)行觀察和拍照。

在制備過(guò)程中,需要注意以下幾點(diǎn)以確保制樣質(zhì)量:

確保所有使用的試劑和工具都是干凈、無(wú)菌的,以避免污染樣品。

在處理過(guò)程中要輕柔、細(xì)致,避免對(duì)樣品造成機(jī)械損傷或化學(xué)腐蝕。

嚴(yán)格控制每個(gè)步驟的時(shí)間和條件,以確保樣品的形態(tài)和結(jié)構(gòu)在制備過(guò)程中保持穩(wěn)定。

總之,SEM掃描電鏡生物樣品的制備過(guò)程需要仔細(xì)操作以確保制樣質(zhì)量,從而獲得清晰、準(zhǔn)確的觀察結(jié)果。

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